一、实验前期准备

1. 仪器与耗材准备

设备采用芬兰Kibron系列界面张力分析仪，配备DyneProbe金属探针、温控模块、配套数据采集软件、石英样品杯。耗材包含各类阳离子脂质、辅助磷脂、胆固醇、PEG脂质、乙醇、缓冲液、0.22 μm滤器、微量移液工具、氮气瓶。

探针预处理：使用丁烷火焰灼烧探针，清除表面脂质残留，自然冷却后安装至张力传感器。

将仪器放置在无直吹风的实验区域，开机预热30 min，设置实验温度25±0.5 ℃，启动采集软件完成自检，确认探针移动、张力采集正常。

所有样品杯依次使用无水乙醇、超纯水冲洗，氮气吹干，避免杂质影响界面测量。

2. 溶液配制

脂质母液配制：按照LNP常用溶剂体系，将阳离子脂质、磷脂、胆固醇、PEG脂质分别溶于无水乙醇，配制统一浓度脂质储备液，避光低温保存。

水相缓冲液：选用醋酸盐缓冲液或HEPES缓冲液，调节至目标pH，配制完成后使用0.22 μm水系滤膜过滤，超声脱气30 min备用。

梯度脂质混合液：设计多组不同摩尔比例的脂质混合配方，固定总脂质浓度，调整阳离子脂质、胆固醇、辅助磷脂、PEG脂质相对比例，形成配比梯度系列。每组脂质混合物充分涡旋混匀，现配现用。

3. 基线校准与空白验证

向样品杯中装入脱气缓冲水相，调整探针高度使探针充分浸润液体，静置平衡后进行基线归零。

测量纯水或缓冲液表面张力，数据稳定且和理论值偏差小于0.3 mN/m，说明探针洁净。

设置空白对照组：仅脂质乙醇溶剂加入水相，测定溶剂本身造成的张力变化，用于后续数据扣除，消除有机溶剂干扰。

二、梯度脂质配比张力筛选完整操作流程

1. 样品体系搭建

向洁净样品杯中加入定量水相缓冲液，放置于温控样品台，等待温度稳定至设定温度。

使用微量注射器缓慢将脂质乙醇混合溶液沿杯内壁注入水相下层，轻柔混匀，模拟LNP自组装初期脂质向水界面迁移过程，避免剧烈震荡产生大量微小气泡。

体系静置5 min，消除加样带来的扰动，确认液面平整无大量泡沫。

2. 动态表面张力采集操作

调节探针下降至液面位置，在软件中设定连续采集模式，持续记录表面张力随时间变化，采集时长一般设置60–120 min，获取动态张力曲线，直至张力趋于稳定，记录平衡表面张力。

同一脂质配比至少平行测试3次。

完成一组测试后，升起探针，再次火焰灼烧清洁；样品杯废液倾倒干净，乙醇清洗、超纯水润洗，氮气吹干，再进行下一组配比测试，防止不同脂质组分交叉污染。

3. 梯度配比有序测试安排

按照预设配比梯度依次上机测试，优先单一变量原则，例如固定胆固醇比例，改变阳离子脂质与磷脂比例；或是固定阳离子脂质，梯度调整PEG脂质占比。

同步设置参考处方作为阳性对照，方便横向对比界面张力水平。

记录每一组配方对应的初始张力、张力下降速率、平衡表面张力、达到平衡所需时间。

三、数据处理、筛选判断标准与质控要点

1. 数据导出与参数提取

从采集软件导出动态表面张力-时间曲线，提取关键参数：初始表面张力、平衡表面张力、张力下降速率、吸附平衡时间。

汇总全部梯度配比的数据，绘制脂质配比-平衡张力变化趋势图。

2. 处方筛选判断逻辑

脂质混合物能够快速降低水相表面张力，平衡表面张力更低，代表脂质分子更容易在气液界面排布，预示该配比具备良好膜形成能力，有利于自组装形成粒径均一的LNP。

张力下降速度越快，说明脂质界面吸附动力学更优，在纳米粒制备过程中更容易快速形成完整脂质囊泡膜。

若平衡表面张力偏高，且长时间无法达到稳定，说明该脂质组合界面排布能力差，容易出现组装缺陷，成品LNP易粒径偏大、多分散性升高。

同时结合不同配比张力曲线重复性，重复性差的配比，脂质相容性不佳，不适合作为候选处方。

3. 关键质控注意事项

脂质乙醇溶液添加速度需要保持统一，加样方式全程标准化，减小人为操作带来的误差。

体系中乙醇终浓度保持一致，不同组别溶剂比例不能随意变动，有机溶剂会直接影响表面张力数值。

全程避免气流直吹样品液面，减少挥发与界面扰动。

脂质溶液易氧化，配制与测试过程尽量缩短暴露空气时间，必要时避光操作。

探针每次样品间必须灼烧清洁，脂质极易吸附在金属探针表面，持续污染后续样品。

四、后续验证衔接方案

经过Kibron梯度张力筛选得到的优选脂质配比，下一步可开展纳米脂质体制备实验，测定LNP粒径、多分散指数、包封效率，验证界面张力筛选结论。对于筛选出的潜力配方，还可以使用Kibron 抖淫成年app下载开展磷脂单分子膜相互作用测试，进一步研究脂质之间的膜相容性，深入解析配比影响囊泡形成的内在机制。